SLE患者外周血淋巴細胞的CD40-CD40L表達及意義

作者：王世俊 劉東海

作者單位：315400 浙江省余姚市人民醫(yī)院檢驗科　315000 浙江省寧波二院中心實驗室

【關鍵詞】  系統(tǒng)性紅斑狼瘡

　　系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus SLE）是自身免疫介導的、以免疫性炎癥為突出表現(xiàn)的彌漫性結締組織病。SLE的發(fā)病機制復雜，至今仍未完全闡明，目前普遍認為免疫調節(jié)異常在其發(fā)病中起到了主導作用，其中包括一對共刺激信號CD40-CD40L的調節(jié)異常，淋巴細胞的功能失調、異常活化等。本研究采用流式細胞術測定SLE患者CD40-CD40L、異?；罨馨图毎谋磉_，以及與疾病活動度的關系，為揭示SLE的發(fā)病機制提供實驗依據(jù)。
　　
　　1  資料與方法

　　1.1  一般資料  2004年3月至2007年3月，本院救治SLE患者32例，均符合美國風濕病學會（ARA）1982年修訂SLE分類標準［１］。根據(jù)歐洲狼瘡活動性指標積分評分［２］，分為活動期和緩解期，其中活動期SLE患者15例，男3例，女12例；年齡12～50歲。緩解期SLE患者17例，男3例，女14例；年齡11～51歲。正常對照組為18例健康體檢者，無自身免疫病史，男5例，女13例；年齡17～37歲。

　　1.2  主要試劑與儀器  鼠抗人單克隆抗體CD40-PE、CD40L-PE 相同熒光標記的同種型免疫型蛋白陰性對照均購于法國（IMMUNERECH）公司，Q-PREP溶血儀、EPICS-XL流式細胞儀為美國BECKMAN COULTER 公司產品。

　　1.3  檢測方法  (1)采用微量全血標記法，即取EDTA-K2抗凝血50μl分別加入15mm×75mm Falcon管中；(2)分別加入10μl熒光標記鼠抗人單克隆抗體CD40-PE、CD40L-PE 陰性對照加入相同熒光標記的同種型免疫型蛋白，室溫避光孵育15min；(3)用Q-PRCP儀溶血、固定 ；(4)流式細胞儀上機檢測：樣本上機前，先用熒光微球調整光路，根據(jù)前向角（FSC）與側向角（SSC）設門，用陰性對照設定閾值，接著樣本上機，分別設門于淋巴細胞和單核細胞在門內收集10000個以上的細胞，記錄CD40、CD40L的陽性百分率。

　　1.4  統(tǒng)計學處理  所有的資料均用(x±s)表示，組間比較采用t檢驗。

　　2  結果
   
　　活動期SLE患者淋巴細胞表達的CD40、CD40L均明顯高于正常對照組（P<0.05)，緩解期SLE患者淋巴細胞表達的CD40L亦明顯高于正常對照組（P<0.05)，而緩解期SLE患者淋巴細胞表達的CD40與正常對照組比較，差異無顯著性（P>0.05），見表１。32例SLE患者（活動期和緩解期）淋巴細胞CD40、CD40L的表達量與淋巴細胞活化的相關性分析：淋巴細胞CD40表達量與CD3-HLADR呈正相關（R=0.551，P<0.05)，淋巴細胞CD40L表達量與CD3-HLADR亦呈正相關（R=0.586，P<0.05)。

　　表1  SLE患者CD40-CD40L檢測結果（略）

　　正常對照組與活動期比較*P<0.05，與緩解期比較#P<0.05

　　3  討論
    　　
　　系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種以多器官、多系統(tǒng)損害，體內有多種自身抗體為特征的自身免疫性疾病。SLE許多臨床癥狀被認為是B細胞功能亢進所引起，即B細胞的高度活化，產生針對自身組織（包括細胞核及各種核的成分、細胞膜、細胞漿各種組織成分）的自身抗體，它們只能與自身組織抗原結合，形成自身免疫復合物，從而引起全身一系列的反應。CD40和CD40L是一對介導B細胞和T細胞之間信號傳導的共刺激分子。既往的研究表明活化的T細胞的CD40L與B細胞的CD40分子結合，通過誘導細胞活化和細胞因子的產生，直接參與調節(jié)體液免疫，間接調節(jié)細胞免疫；可以促進B細胞生長、分化、克隆轉換、IG分泌及阻斷B細胞凋亡，促進自身抗體的產生［3～5］。本實驗結果顯示，活動期SLE患者淋巴細胞表達的CD40與CD40L明顯增加，高于正常對照組；活動期與緩解期比較，雖差異無顯著性，但前者高于后者。至于三組之間差別，活動期SLE患者高，正常對照組低，這說明了PBMC的CD40-CD40L異常表達與SLE發(fā)病密切相關，同時也表明了與疾病的發(fā)展程度有關。