酶標(biāo)儀參數(shù)及性能檢測(cè)

 作者：曾俊，張丹桂，王革非，陳小璇，李康生

【摘要】 目的：檢測(cè)Bio_Rad 3550UV型酶標(biāo)儀是否仍能應(yīng)用于精密的酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA的檢測(cè)。方法：對(duì)Bio_Rad 3550UV型酶標(biāo)儀的一些重要參數(shù)(濾光片精度，檢測(cè)結(jié)果可重復(fù)性，線(xiàn)性相關(guān)性以及通道間的差異等進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)與新型酶標(biāo)儀作比較。結(jié)果：Bio_Rad 3550UV酶標(biāo)儀各項(xiàng)重要參數(shù)均符合檢測(cè)要求。結(jié)論：Bio_Rad 3550UV酶標(biāo)儀仍然能應(yīng)用于精密的ELISA檢測(cè)。

【關(guān)鍵詞】 酶標(biāo)儀；性能檢測(cè)；參數(shù)檢測(cè)

　　酶標(biāo)儀是實(shí)驗(yàn)室的常用貴重儀器，主要應(yīng)用于酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA，檢測(cè)樣本吸光度值。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，酶免疫分析法的自動(dòng)化程度及精確性有了很大的提高，其在生物醫(yī)學(xué)和臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛。1993年我室購(gòu)買(mǎi)了Bio_Rad 3550UV酶標(biāo)儀，我們對(duì)該儀器的一些重要參數(shù)(濾光片精度，檢測(cè)結(jié)果可重復(fù)性，線(xiàn)性相關(guān)性以及通道間的差異性等進(jìn)行了檢測(cè)，同時(shí)與新型酶標(biāo)儀作了比較。

1 材料與方法

1.1 材料Bio_Rad 3550UV酶標(biāo)儀(Bio_Rad公司，美國(guó)，SPECTRAMAX 190和SPECTRAMAX 340PC酶標(biāo)儀(MD公司，美國(guó)，酶標(biāo)板(biomat；DU 640紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)(BECKMAN公司，美國(guó)。重鉻酸鉀：配制質(zhì)量濃度5mg/mL的重鉻酸鉀溶液，再對(duì)其進(jìn)行連續(xù)倍比稀釋得到T1～7，其質(zhì)量濃度分別為5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0.078mg/mL。

1.2 方法

1.2.1 濾光片波長(zhǎng)精度檢查 采用高精度紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)對(duì)不同波長(zhǎng)的濾光片進(jìn)行光譜掃描，所得檢測(cè)值與濾光片標(biāo)定值之差稱(chēng)為濾光片的精度，精度＜5為正常，差值越接近于零說(shuō)明精度越高［1］。

1.2.2 儀器的重復(fù)性檢查 對(duì)同一孔用450nm波長(zhǎng)［2］(參考波長(zhǎng)630nm連續(xù)測(cè)5次，取高OD值(H、低OD值(L，計(jì)算重復(fù)誤差率(dev/%((H_L/(H+L。重復(fù)誤差率應(yīng)≤0.5%。

1.2.3 線(xiàn)性相關(guān)性及通道間差異檢測(cè) 取一排潔凈的酶標(biāo)板條(8個(gè)小孔杯，依次加入重鉻酸鉀溶液，每孔100μL，第8孔加入蒸餾水作空白對(duì)照。以酶標(biāo)板架為載體，先后把酶標(biāo)板條置于8個(gè)通道：①線(xiàn)性相關(guān)性檢測(cè)：用450nm波長(zhǎng)(參考波長(zhǎng)630nm對(duì)每個(gè)通道連續(xù)檢測(cè)5次，取均值，對(duì)吸光度與稀釋度作線(xiàn)性相關(guān)分析。②通道間差異檢測(cè)：取8個(gè)通道中的高OD值(H、低OD值(L，計(jì)算通道間差異率((H_L/(H+L。通道間差異率應(yīng)≤1.5%。

1.2.4 與新型同類(lèi)儀器比較 將同一樣本分別在Bio_Rad 3550UV、SPECTRAMAX 190及SPECTRAMAX 340PC酶標(biāo)儀上檢測(cè)，對(duì)比分析檢測(cè)結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 濾光片波長(zhǎng)精度檢查濾光片的精度如何直接影響儀器的靈敏度和檢測(cè)結(jié)果。對(duì)本儀器的濾光片用分光光度計(jì)檢測(cè)，濾光片的精度均小于5，說(shuō)明濾光片質(zhì)量可靠(表1。表1 分光光度計(jì)檢測(cè)濾光片的精度

2.2 儀器的重復(fù)性檢查

在儀器可測(cè)范圍(OD 0.10～2.00內(nèi)重復(fù)性誤差率＜0.5%，在OD值低于0.005時(shí)誤差較大(表2。表2 倍比稀釋濃度重鉻酸鉀檢測(cè)儀器的重復(fù)性

2.3 線(xiàn)性相關(guān)性及通道間差異檢測(cè)

以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度(OD值為縱坐標(biāo)，線(xiàn)性方程為y=0.351x+0.032，r=0.998。通道間差異率(表3可見(jiàn)通道間的差異與吸光度相關(guān)，在儀器的佳測(cè)量范圍(OD值0.15～1.50內(nèi)通道間差異率低于1.5%［1］。表3 同一酶標(biāo)條在不同通道間的OD值 *在同一通道上連續(xù)測(cè)5次后取均值

2.4 與新型同類(lèi)儀器比較

對(duì)所測(cè)數(shù)據(jù)作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，在OD值(0.15～1.50范圍內(nèi)3臺(tái)儀器間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖1。圖1 三臺(tái)儀器對(duì)同一樣本的檢測(cè)值

　　3 討論

我們采用的是雙波長(zhǎng)檢測(cè)，參考波長(zhǎng)630nm。因?yàn)樵谟脝我徊ㄩL(zhǎng)檢測(cè)時(shí)各孔間的差異較大(數(shù)據(jù)未列出，與報(bào)道一致［3］。通過(guò)與新型酶標(biāo)儀比較，可知本儀器的OD值在0.10～1.50，檢測(cè)結(jié)果比較準(zhǔn)確。這與儀器的檢測(cè)原理(Bouger_amberT_beer法則相符。根據(jù)對(duì)我室1993年購(gòu)置的Bio_Rad 3550UV酶標(biāo)儀各項(xiàng)重要參數(shù)檢測(cè)結(jié)果及與二臺(tái)新型酶標(biāo)儀結(jié)果比較表明，Bio_Rad 3550UV酶標(biāo)儀仍然能應(yīng)用于精密的ELISA檢測(cè)。

【參考文獻(xiàn)】
［1］成軍， 孫關(guān)忠， 鄭懷競(jìng), 等．酶標(biāo)儀性能評(píng)價(jià)與鑒定的基本方法及其初步應(yīng)用［J］． 中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志, 1998, 21(1: 50-51.

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