Livin基因在口腔粘膜白斑與口腔癌中的表達(dá)

【摘要】 目的：探討Livin基因基因在口腔粘膜白斑、口腔癌的表達(dá)相關(guān)性。方法：應(yīng)用免疫組化(S-P)法檢測Livin基因在48例口腔粘膜白斑(輕度增生l2例，中度增生l8例，重度增生l8例)、口腔癌32例中的表達(dá)。結(jié)果：在口腔粘膜白斑輕、中度不典型增生組織中Livin基因呈弱表達(dá)(1／12， 3／18)；在口腔粘膜白斑重度不典型增生中表達(dá)率明顯增高(13／18，72．2％)，口腔癌中Livin基因表達(dá)率很高(29／32，90.6％)，口腔粘膜白斑的輕、中度不典型增生與重度不典型增生的表達(dá)比較有顯著的意義(P<0.05)，但與癌的表達(dá)無顯著意義(P>0.05)。結(jié)論：Livin基因的表達(dá)與增生的程度有關(guān)，Livin基因的表達(dá)可能與口腔癌的發(fā)生有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 口腔粘膜白斑

　　凋亡抑制蛋白(IAP)是一類含眾多成員的凋亡抑制蛋白家族，在抑制凋亡和促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增生中起著重要的作用。Livin是新發(fā)現(xiàn)的IAP家族成員之一，主要是通過和Caspase蛋白結(jié)合抑制其級聯(lián)激活反應(yīng)而發(fā)揮抗凋亡作用。已有研究表明Livin在多種腫瘤組織呈陽性表達(dá)，在腫瘤組織的增殖和凋亡過程中發(fā)揮重要作用［1］。由于Livin在一些腫瘤組織中呈特異表達(dá)，故而進(jìn)一步研究它與腫瘤病理類型、分化程度以及化療后對其表達(dá)的影響的關(guān)系，以此為臨床的有效診治提供依據(jù)。我們采用免疫組化方法，檢測口腔粘膜白斑不典型增生的Livin基因蛋白的表達(dá)情況，并與口腔癌的表達(dá)情況進(jìn)行對比，探討Livin基因與白斑不典型增生惡性轉(zhuǎn)化關(guān)系。

　　1 材料和方法

　　1.1 材料來源：90例口腔組織蠟塊取自我院及廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，為2000年至2006年手術(shù)切除或活檢標(biāo)本，其中口腔粘膜白斑48例，口腔癌32例，所有組織均經(jīng)4％甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋。

　　1.2 組織學(xué)分類：依據(jù)《診斷病理學(xué)》劉彤華主編標(biāo)準(zhǔn)將口腔粘膜白斑分為輕、中、重三類，其中輕度不典型增生12例，中度不典型增生18例，重度不典型增生18例，口腔癌32例。其中唇癌12例，舌癌13例，口底癌7例。

　　1.3 方 法

　　1.3.1 免疫組織化學(xué)方法：采用鏈霉菌抗生物素蛋白一過氧化酶連接(SP)免疫組織化學(xué)方法，抗Livin單克隆抗體及SP試劑盒，均為福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司產(chǎn)品。實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說明書進(jìn)行，用PBS代替一抗作為陰性對照。

　　1.3.2 結(jié)果判定：在組織切片中顯示胞核或胞漿染為淡黃至黃棕色者為陽性細(xì)胞標(biāo)志，將陽性細(xì)胞按其數(shù)量及顯色強(qiáng)度分為3級：表達(dá)弱陽性(+)，即陽性細(xì)胞數(shù)<10％，顯色強(qiáng)度為淡黃色或僅個別細(xì)胞呈黃至棕黃色染色；表達(dá)強(qiáng)陽性(+++)，即陽性細(xì)胞數(shù)>60％，多數(shù)細(xì)胞呈黃至棕黃色染色；表達(dá)中度陽性(++)，即陽性細(xì)胞數(shù)及顯色強(qiáng)度介于弱陽性與強(qiáng)陽性之間。凡顯色強(qiáng)度與背景無明顯差別者為陰性。

　　1.4 統(tǒng)計學(xué)方法：采用X2檢驗(yàn)。

　　2 結(jié) 果

　　Livin基因蛋白在口腔粘膜白斑與口腔癌中的表達(dá)，見表1。

　　表1 口腔粘膜白斑不同類型與口腔癌組織中Livin基因蛋白表達(dá)　略

　3 討 論

　　凋亡抑制蛋白是一類內(nèi)源性細(xì)胞凋亡抑制因子，在很多物種中起著抑制凋亡的作用，其過度的表達(dá)引起細(xì)胞凋亡不足與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。Livin作為人類IAP家族的新成員，有明顯的抗細(xì)胞凋亡作用，它主要通過與介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的下游效應(yīng)分子Caspase，即激活形式的Caspase3和Caspase7結(jié)合，并抑制其活性而發(fā)揮作用的。Livin與Caspase結(jié)合有高度的親和性和特異性，這依賴于BIR(N端86—154)結(jié)構(gòu)域的完整。BIR是一種新型的鋅指結(jié)構(gòu)，而Livin中BIR結(jié)構(gòu)是抗凋亡活性所必需。如BIR結(jié)構(gòu)域單個氨基酸發(fā)生突變可導(dǎo)致Livin與Caspase親和力下降，使Livin的抗凋亡能力明顯減低甚至消失［2，3］。Livin是近幾年新發(fā)現(xiàn)的一類內(nèi)源性細(xì)胞凋亡抑制因子，它含IAP家族特有的BIR和RING(C端環(huán)指結(jié)構(gòu))結(jié)構(gòu)域。Livin在正常組織一般不表達(dá)或表達(dá)很低，但其在一些腫瘤系中卻高表達(dá)，如黑色素瘤、胃腸癌、膀胱癌、乳腺癌、白血病及淋巴瘤等［3］。

　　我們用免疫組織化學(xué)方法，對80例口腔粘膜上皮惡性不同轉(zhuǎn)化不同階段的石蠟包埋標(biāo)本Livin基因蛋白表達(dá)的檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)口腔粘膜白斑在輕、中度不典型增生組織中Livin基因蛋白表達(dá)率很低，口腔粘膜白斑重度不典型增生，Livin基因蛋白表達(dá)率明顯上升，與口腔癌的Livin基因蛋白表達(dá)率相比無顯著的差異，說明Livin基因蛋白表達(dá)在一定程度上與細(xì)胞的惡性傾向有關(guān)。可以推測重度不典型增生的口腔黏膜白斑內(nèi)的Livin基因蛋白的表達(dá)，它們具有一定惡變的潛能。臨床上對重度不典型增生的口腔黏膜白斑應(yīng)高度重視，密切觀察臨床經(jīng)過。



【參考文獻(xiàn)】
?。?］ KASOF GM，COMES BC．Livin，a novel inhibitor of apoptosis protein family member［J］． Biol Chem，2001，276：3238-3246．

　　［2］ 張華東，袁守軍，陳惠鵬．Livin一癌癥治療的新靶點(diǎn)［J］．中國藥理學(xué)通報，2003，19(8)：845-847．

　?。?］ D Vucic, HR Stennicke, MT Pisabarro,et al.ML-IAP, a novel inhibitor of apoptosis that is preferentially expressed in human melanomas［J］. Curr Biol, 2000，10(21): 1359-1366.