ICAM3在急性白血病中的表達及臨床意義

　　作者：陳玲,于桂蘭,李元堂,趙廣玲,徐功立　　作者單位：山東大學附屬省立醫(yī)院 1. 血液科; 2. 檢驗科， 濟南 250021

　　【摘要】目的 探討細胞間粘附分子3(intercellular adhesion molecule3，ICAM3)在急性白血病(acute leukemia,AL)中的表達及其在臨床療效、髓外浸潤中的意義。方法 采用骨髓涂片免疫組織化學法檢測了33例急性非淋巴細胞白血病(acute nonlymphoblstic leukemia，ANLL)、21例急性淋巴細胞白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)患者治療前后及10例正常對照骨髓單個核細胞ICAM3的表達率。結(jié)果 化療前AL組ICAM3表達率均顯著高于正常對照組，ANLL組與ALL組比較ICAM3表達率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，且TALL組與BALL組ICAM3表達率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);ICAM3的表達與患者發(fā)病年齡、性別、就診時血紅蛋白(Hb)、血小板(BPC)等因素無關(guān)，與骨髓原始細胞比例呈正相關(guān)(r=0.467,P<0.01);外周血白細胞(WBC)≥100×109患者ICAM3的表達率比WBC<100×109組高(P<0.05);所有AL患者經(jīng)過一個療程化療后ANLL、ALL未緩解組的ICAM3表達率明顯高于緩解組(P<0.01)，但緩解組與對照組之間ICAM3表達率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);組織浸潤組骨髓AL細胞ICAM3表達率高于無組織浸潤組(P<0.01)。結(jié)論 ICAM3在AL中的表達明顯高于正常對照組，其表達水平的高低可作為AL觀察臨床療效及判斷預后的指標之一。同時，AL的組織浸潤機制可能與細胞間粘附分子表達升高有關(guān)。

　　【關(guān)鍵詞】 急性白血病;細胞間粘附分子3,髓外浸潤

　　To explore the ex[x]pressions of the intercellular adhesion molecule3(ICAM3) in acute leukemia and to investigate its role in clinical therapeutic efficacy and extramedullary infiltration (EI). Methods The ex[x]pressions of ICAM3 in 33 cases of acute nonlymphoblastic leukemia(ANLL), 21 cases of acute lymphoblastic leukemia (ALL) and 10 normal bone marrow mononuclear cells were determine by bone marrow smear immunohistochemistry. Results The ex[x]pression of ICAM3 in AL patients was significantly higher than that in the controls, and it had no correlation with patients′ age, gender, Hb and BPC, but had direct correlations with the ratio of primitive bone marrow cells. Also the ex[x]pression of ICAM3 was higher in patients whose WBC≥100×109/L than in patients whose WBC<100×109/L(P<0.05), and also was much higher in AL patients without complete remission (CR) than in AL patients with CR(P<0.01), but there were no significant differences between patients with CR and the controls(P>0.05). Meanwhile the ex[x]pression of ICAM3 was much higher in leukemic cells with EI than that in leukemia cells without EI(P<0.01). Conclusion ICAM3 could be used as a helpful marker to assess the therapeutic efficacy and prognosis for AL, and its increase might relate to infiltration of acute leukemic cells.

　　Key words: Acute leukemia; Intercellular adhesion molecule3 ; Extramedullary infiltration

　　細胞間粘附分子3(intercellular adhesion molecule3，ICAM3) 即CD50,屬于免疫球蛋白超家族，是淋巴細胞功能相關(guān)抗原1(lymphocyte function associated antigen1，LFA1)的第三受體，表達在所有的白細胞上，而在內(nèi)皮細胞上多缺如。研究表明,急性白血病(acute leukemia,AL)細胞粘附分子(intercellular adhesion molecules, ICAMs)表達異常與白血病發(fā)生、發(fā)展及預后密切相關(guān)[12]，并參與腫瘤細胞的“免疫逃脫”作用。本研究對54例初診AL患者的ICAM3水平進行檢測,旨在探討其在臨床療效、預后及髓外浸潤中的意義。

　　1 資料與方法

　　1.1 臨床資料 2007年4月至11月在山東大學附屬省立醫(yī)院血液科收治的初發(fā)AL患者54例。男33例，女21例，年齡12～77歲，中位年齡40.5歲，均按統(tǒng)一標準診斷與分型[3]。(1) 急性非淋巴細胞性白血病(acute nonlymphoblastic leukemia，ANLL)33例，男21例，女12例。入院時白細胞(WBC) 0.06×109/L～155.03×109/L,中位數(shù)8.90×109/L。血紅蛋白(Hb) 40?g/L～131?g/L，中位數(shù)71?g/L。血小板(BPC) 6×109/L～153×109/L,中位數(shù)22×109/L。骨髓原始細胞百分比為29.5%～96.0%，中位數(shù)86.0%;(2)　急性淋巴細胞白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)21例，其中BALL 14例，TALL 7例。14例BALL患者中，男8例，女6例。WBC 1.22×109/L～43.0×109/L,中位數(shù)4.34×109/L。Hb 49?g/L～123?g/L，中位數(shù)94.5?g/L。BPC 24×109/L～146×109/L, 中位數(shù)65×109/L。骨髓原始細胞百分比為56.5%～93.0%，中位數(shù)85.75%;7例TALL患者，男4例，女3例。WBC 1.10×109/L～146.26×109/L,中位數(shù)108.22×109/L。Hb 43?g/L～147?g/L，中位數(shù)72?g/L。BPC 16×109/L～101×109/L,中位數(shù)36×109/L。骨髓原始細胞百分比為77.5%～97.0%，中位數(shù)89.5%。

　　上述ANLL和ALL患者均除外以下疾病:① 近期各種感染性疾病或伴有嚴重肝腎功能異常;② 近3個月發(fā)生過急性心衰、心梗;③ 自身免疫性疾病及免疫缺陷性疾病;④ 近期服用影響免疫功能的藥物;⑤ 妊娠或哺乳期婦女;所有入組患者均在第1次及第2次化療前分別作骨髓穿刺涂片留取標本，第1次化療后一般休藥7～14?d開始第2療程治療。(3) 正常對照組10例,男6例,女4例, 年齡12～74歲,中位年齡41.5歲。為山東大學附屬省立醫(yī)院非血液病患者。

　　1.2 免疫組織化學二步法檢測各組骨髓單個核細胞ICAM3的表達 選擇國際上的線單抗，ICAM3抗體購于美國Labvision公司，應用抗生物素蛋白生物素復合物(ABCAP)染色技術(shù)對骨髓涂片進行ICAM3的檢測(玻片法)。將骨髓涂片置純丙酮內(nèi)固定5～10?min后即刻置于洗滌液內(nèi)浸洗3?min/次，3次。取出涂片滴加單克隆一抗，置濕盒內(nèi)30?min(實驗操作過程中室溫控制在20～25?℃)，后置于洗滌液內(nèi)浸洗3?min/次，3次。滴加反應集合物，置濕盒內(nèi)30?min，后置于洗滌液內(nèi)浸洗3?min/次，3次。滴加顯色劑5～10?min，流水沖洗，蘇木素復染后流水沖洗3～5?min，晾干，甘油-明膠封片、鏡檢。

　　結(jié)果判斷 陽性表達：細胞膜或細胞漿見鮮紅色沉淀物。陰性表達：細胞膜或細胞漿未見鮮紅色沉淀物。油鏡下每張涂片選取5個有代表性的高倍視野,每個視野計數(shù)200個單個核細胞,計算陽性細胞百分數(shù)。

　　1.3 白血病髓外浸潤臨床判斷指標 具有下列之一即為髓外浸潤組: ① 齒齦明顯增生腫脹; ② 肝、脾、淋巴結(jié)腫大; ③ 腦膜浸潤(中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病); ④ 皮膚結(jié)節(jié)。以上體征均在化療后隨病情好轉(zhuǎn)而改善，隨病情惡化而加重。

　　1.4 治療方案 ALL組給予VDLP(長春新堿，浙江海正藥業(yè)股份公司生產(chǎn)，批號：070401A;柔紅霉素，意大利愛寶藥廠生產(chǎn)，批號：TF1008B;左旋門冬酰胺酶，江蘇常州千紅生化制藥有限公司，批號：070328;強的松，江蘇鵬鷂制藥有限公司生產(chǎn)，批號：0708242) 4周為一療程化療。ANLL 組除M3型采用全反式維甲酸(山東良福制藥有限公司，批號：070601)或全反式維甲酸與化療結(jié)合治療，余皆給予DA(柔紅霉素;阿糖胞苷，哈爾濱博萊制藥有限公司，批號：070226) 或HA(高三尖杉酯堿，浙江杭州民生制藥集團有限公司，批號：0703039;阿糖胞苷) 1周方案化療。所有藥物均按常規(guī)標準劑量及用法應用。

　　1.5 完全緩解標準(CR) ① 臨床無白血病浸潤所致的癥狀和體征，生活正?；蚪咏?② 血象：Hb≥100?g/L(男)或90?g/L(女性及兒童)，中性粒細胞值≥1.5×109/L,血小板≥100×109/L，外周血白細胞分類中無白血病細胞;③ 骨髓象：原粒細胞Ⅰ型+Ⅱ型(原單+幼單核細胞或原淋+幼淋巴細胞)≤5%，紅細胞及巨核細胞系列正常。

　　1.6 統(tǒng)計學處理 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析。數(shù)據(jù)采用中位數(shù)、±s、百分率表示,多組間均數(shù)比較采用方差分析，兩組間均數(shù)比較采用t檢驗，兩參數(shù)間的相關(guān)性采用Spearman等級檢驗。

　　2 結(jié) 果

　　2.1 化療前各組ICAM3的表達 見圖1，表1。由圖1可見，ICAM3在AL細胞高表達。由表1可見，與正常對照組比較，ANLL組與ALL組化療前ICAM3表達率顯著升高，但ANLL組化療前ICAM3表達率與ALL組差異無統(tǒng)計學意義，TALL組與BALL組比較化療前ICAM3表達率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

　　2.2 化療后各組間ICAM3的表達率的比較 經(jīng)過一個療程的化療后，ANLL、ALL緩解組ICAM3的表達與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);未緩解組的ICAM3表達率明顯高于緩解組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，見表2。

　　3 討 論

　　ICAM3在人正常骨髓內(nèi)皮細胞以及原代臍靜脈內(nèi)皮細胞呈低水平表達[4]。近年來研究表明其在細胞內(nèi)信號傳遞過程中也起一定作用[5]。ICAM3在局部免疫應答中早啟動，主要介導白細胞之間及T細胞與抗原遞呈細胞之間的粘附，參與樹突狀細胞與T細胞相互作用，誘導T細胞早期活化，對免疫應答的誘導階段具有重要作用，并與LFA1結(jié)合通過分子結(jié)構(gòu)而調(diào)節(jié)細胞間粘附分子1(ICAM1，CD54)/LFA1的相互作用[6]。AL是常見的血液系統(tǒng)惡性腫瘤,發(fā)病機制尚不明確。近年來對基因調(diào)控的深入研究證實AL的發(fā)生與眾多基因參與的異常信號傳導有關(guān),其中粘附分子的主要作用是促進異源細胞間的相互粘附,使得不同細胞間的相互效應得以實現(xiàn),形成腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移[7]。

　　本研究應用免疫組織化學法檢測了正常對照組、AL組骨髓單個核細胞ICAM3表達率, 結(jié)果顯示ICAM3在正常對照組表達率很低，而ANLL組、ALL組表達率顯著高于正常對照組。ICAM3的表達在ANLL組與ALL組及TALL組與BALL組差異無統(tǒng)計學意義。推測ICAM3的表達可能與細胞類型無關(guān)。ICAM3在所有類型AL患者骨髓白血病細胞表達顯著升高，可能與白血病的早期形成密切相關(guān)。國外已有研究證實在淋巴系的腫瘤中ICAM3的表達上調(diào)[8]。Kim等[9]研究顯示ICAM3可誘發(fā)非小細胞肺癌細胞株H1299的大量增值。提示ICAM3可能是腫瘤形成的相關(guān)調(diào)控因子。

　　本研究結(jié)果顯示，ICAM3在外周血WBC計數(shù)≥100×109/L(即高白細胞急性白血病)患者的表達高于WBC<100×109組(P<0.05)，且WBC≥100×109/L的患者CR低，預后較差?；熐癐CAM3表達率與骨髓原始細胞比例呈正相關(guān)，這可能與腫瘤負荷有關(guān)。Darom等[10]檢測了36例B淋巴細胞粘膜相關(guān)性淋巴瘤患者ICAM3的表達，發(fā)現(xiàn)ICAM3的表達與腫瘤負荷成比例，ICAM3水平高，則腫瘤負荷高。本研究中所有AL患者經(jīng)過一個療程化療后ANLL、ALL未緩解組與緩解組ICAM3表達率有顯著差異，未緩解組的ICAM3表達率明顯高于緩解組(P<0.01)，但緩解組與對照組之間ICAM3表達率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，提示ICAM3的表達率可作為臨床療效判斷的指標之一。

　　骨髓外浸潤是影響白血病患者預后的重要因素之一。本研究將初發(fā)的AL患者分為浸潤組與非浸潤組，研究發(fā)現(xiàn)組織浸潤組骨髓AL細胞ICAM3表達率高于無組織浸潤組(P<0.01)。推測ICAM3可能改變了白血病細胞的生物學行為,導致其浸潤和擴散的發(fā)生：① ICAM3/LFA1粘附機制直接介導其浸潤,通過這些互為配體/ 受體的粘附分子的播散,加速疾病發(fā)生、發(fā)展;② 由于ICAM3能與LFA1結(jié)合通過分子結(jié)構(gòu)而調(diào)節(jié)ICAM1/LFA1的相互作用，亦可能間接成為白血病細胞發(fā)生浸潤和轉(zhuǎn)移的一條途徑。

　　總之，AL患者的白血病細胞上存在異常表達的ICAM3，這些異常表達可能是白血病早期形成的相關(guān)調(diào)控因素，同時提示可將ICAM3表達率作為觀察臨床療效及判斷預后的指標之一。另外，白血病的組織浸潤可能與ICAM3表達增高有關(guān)，但其具體機制尚不明確，有待進一步研究觀察。