大腸癌中環(huán)氧化酶-2和生存素的表達與腫瘤血管生成的關系

　    作者：朱正日　　作者單位：佳木斯大學附屬醫(yī)院，黑龍江 佳木斯
      Relationship between the ex[x]pression of cycloxygenase-2 and Survivin and the vascularization in cancer of colon　　ZHU Zhengri，AI Yingchun，LI Chunmei　　(The First Affiliated Hospital of Jiamusi University，Jiamusi 154003,China) Abstract:ob[x]jective:To investigate the relationship between the ex[x]pression of cycloxygenase-2 and Survivin and the vascularization in colon cancer and their correlation with tumor microvessle density.Method:The streptavidin-peroxidase-biotin immunohistochemistry technique was used to detect the ex[x]pression of COX-2，Survivin and MVD(labled by CD34) in 48 cases of colon cancer specimens.The statistical analysis was used for the relationship among the ex[x]pression of COX-2,Survivin and MVD and the clinicopathological features in colon cancer.Results:(1)The positive ex[x]pression rate of COX-2 and Survivin in colon cancer was signifficantly correlated with Dukes staging(P<0.0l).(2)There was a positive correlation between the ex[x]pression of COX-2 and Survivin in colon cancer.(3)The MVD in COX-2 positive group was higher than that in COX-2 negative group,and the MVD in Survivin positive group was higher than that in Survivin negative group,with a significant difference(P<0.0l,P<0.01);The MVD in both positive groups of COX-2 and Survivin was higher than that in both negative groups, with a significant difference(P<0.01).Conclusion:COX-2 and Survivin play a key role in the development of colon cancer,and might synergistically promote the formation of the blood vessel in colon cancer.

　　Key words： cancer of colon;COX-2;Survivin;MVD;tumor vessel;immunohistochemistry

　　大腸癌是世界上常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅著人類的生命健康。近20多年來隨著生活水平的提高，以及飲食結構的改變，我國大腸癌的發(fā)病率呈明顯上升趨勢，腫瘤細胞的擴散轉移是腫瘤患者死亡的重要原因，腫瘤的血管生成已逐漸引起人們的重視。本研究對大腸癌中COX-2和Survivin的表達與MVD進行了檢測，旨在探討它們在大腸癌中的表達與腫瘤血管生成的關系。

　　1 資料與方法

　　1.1 一般資料

　　采用佳木斯大學附屬醫(yī)院2006—08～2007—12手術切除的大腸癌標本48例。術前均未做放療、化療、免疫治療。其中男28例，女20例;<60歲者18例，≥60歲者30例;腫瘤直徑<5cm者22例，≥5cm者26例;直腸癌患者31例，結腸癌患者17例;高分化腺癌18例，中分化腺癌17例，低分化腺癌13例; Dukes分期A期7例，B期14例，C期16例，D期11例。20例腺瘤性息肉和20例大腸正常黏膜作為對照組。

　　1.2 方法

　　采用S-P免疫組化染色法，S-P試劑盒均由福州邁新生物技術有限公司提供。所有標本均為10%中性福爾馬林固定常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)2μm切片。用已知陽性組織切片作陽性對照，每個指標以PBS液代替一抗作陰性對照。

　　1.3 結果判定

　?、貱OX-2陽性染色主要定位于細胞漿 ，為棕黃色顆粒。陽性判斷標準：選擇5個高倍視野進行計數(shù)，根據(jù)染色強度和染色細胞百分率進行綜合評分：基本不著色為0分，細胞染色呈淺黃色為1分;細胞染色呈棕黃色為2分;細胞染色呈棕褐色為3分;著色細胞占計數(shù)細胞百分率,<5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分,≥ 51%為3分。將每張切片平均著色強度得分與平均著色細胞百分率得分各自相乘，為其后得分:得0～1分為陰性(-)，2分以上者為(+)。 Survivin陽性染色主要定位于細胞漿 偶見細胞核表達,為棕黃色顆粒。陽性判斷標準如上。②CD34結果及MVD判定標準：先在低倍光鏡(×100)下選取3個微血管多的視野，即熱點區(qū)(hot spot)，再于高倍鏡(×200)視野下計數(shù)微血管的數(shù)目，求得3個視野的均值作為MVD。

　　1.4 統(tǒng)計方法

　　采用SPSS13. 0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學分析。計量資料分析采用t/t’檢驗，計數(shù)資料比較用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman等級相關分析。MVD值以均數(shù)±標準差(x±s)表示。

　　2 結果

　　2.1 COX-2和Survivin在大腸癌中的表達與性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位以及分化程度均無關(P>0.05),而與Dukes分期密切相關(P<0.05)。見表1，表1 大腸癌中COX-2表達與臨床病理特征的關系(略0

　　2.2 COX-2或Survivin表達陽性組的MVD值明顯高于COX-2或Survivin表達陰性組，COX-2和Survivin均呈陽性時MVD值高，COX-2和Survivin均呈陰性時MVD值低，經(jīng)檢驗差異顯著(P<0.01)。相關分析表明COX-2和Survivin呈正相關。見表2。表2 大腸癌中COX-2和Survivin的表達與MVD的關系(略)

　　3 討論

　　腫瘤的生長和轉移依賴于新生血管的支持，沒有新生血管供給氧和營養(yǎng)物質，腫瘤直徑不會超過2mm，一旦新生血管長入腫瘤組織，腫瘤細胞加速生長，并易侵入血管而發(fā)生遠處轉移。環(huán)氧化酶-2(COX-2)是分解花生四稀酸，合成各種前列腺素(PG)的一個重要限速酶。研究表明它通過促進腫瘤細胞的增殖[1]、抑制凋亡[2～4]、促進腫瘤新生血管生成[5～7]等機制參與多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。本研究結果顯示大腸癌中COX-2表達與患者性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位、分化程度之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，而與Dukes分期密切相關(P<0.05)。與國內外報道相比，COX-2與大腸癌臨床病理特征的關系與大多數(shù)學者結果基本一致。COX-2與大腸癌Dukes分期密切相關，提示COX-2高表達可以影響大腸癌的生物學行為，可使其更易發(fā)生轉移等惡性行為，可能是預后不良的指征。Survivin是新近克隆出的凋亡抑制蛋白家族的新成員，研究表明Survivin可能通過抑制細胞凋亡、調節(jié)細胞周期，參與腫瘤新生血管形成促進了腫瘤的發(fā)生發(fā)展。目前, 有關Survivin 蛋白和大腸癌臨床因素關系的研究報道較少, 結論也并不一致。本研究結果顯示，大腸癌中Survivin表達與患者性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位、分化程度之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05),而與Dukes分期密切相關(P<0.01)。Survivin與大腸癌的臨床分期有關，提示Survivin在大腸癌的發(fā)生發(fā)展中可能起著重要作用，Survivin的高表達促進了大腸癌的轉移潛能，也是大腸癌預后不良的因子之一。本實驗進一步研究了COX-2和Survivin與大腸癌MVD的關系后發(fā)現(xiàn)，COX-2或Survivin表達陽性組的MVD值明顯高于COX-2或Survivin表達陰性組，表明COX-2和Survivin都參與了腫瘤血管的生成。COX-2、Survivin在大腸癌中表達共同陽性組MVD值明顯高于共同陰性組，差異顯著(P<0.01)，提示COX-2與Survivin在大腸癌血管生成過程中可能存在著某種共同的調節(jié)機制，二者協(xié)同促進了大腸癌內血管的生成。我們推測腫瘤內COX-2的表達上調了以VEGF為代表的促血管生長因子的表達，而后者的高表達又刺激了腫瘤內Survivin表達上調，Survivin的高表達促進了腫瘤血管內皮細胞的抗凋亡作用，有利于內皮細胞的增殖及小血管網(wǎng)結構的維持，終COX-2, Survivin在腫瘤血管生成過程中共同起著重要作用。因此我們認為聯(lián)合檢測兩項指標有助于進一步認識腫瘤發(fā)生發(fā)展的機制，并有可能為抗腫瘤血管生成治療提供新的理論依據(jù)。