干細胞治療腦血管病后遺癥臨床療效觀察

　　作者：李銘,王黎明,周建軍,白雯,鐘占強　　作者單位：710054　西安，解放軍第323醫(yī)院細胞治療中心(李銘、王黎明、周建軍、白雯、鐘占強);中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所 血液學(xué)國家重點實驗室(王漢裕、劉擁軍)

　　【關(guān)鍵詞】 干細胞 腦血管病后遺癥 臨床 療效觀察

　　腦血管病(cerebral vascular disease，CVD)是指各種病因使人腦血管發(fā)生病變，造成顱內(nèi)血液供應(yīng)障礙，從而引起腦組織損害的一組疾病。急性CVD一般分為缺血性和出血性2類。該病多見于中老年人，常引起肢體癱瘓、語言障礙、智力下降，嚴重者呈植物人狀態(tài)，甚至死亡。神經(jīng)細胞損傷后難以再生修復(fù)，以致神經(jīng)系統(tǒng)損傷后的臨床癥狀難以改善。目前臨床治療CVD后遺癥的方法包括改善腦血液循環(huán)、促進腦代謝、使用脫水劑等藥物，但均不能保證病變區(qū)腦神經(jīng)細胞的修復(fù)。隨著干細胞工程的推進，細胞再生、修復(fù)治療已成為治療損傷、遺傳缺陷、退行性疾病的新途徑，我科采用的經(jīng)外周血單采純化的CD34+干細胞及臍帶間充質(zhì)干細胞對此類患者進行治療，報道如下。
　　一、資料與方法

　　1. 一般資料：選擇解放軍第323醫(yī)院細胞治療中心2008年10月至2010年4月收治的患者17例，根據(jù)臨床表現(xiàn)和頭部CT和MR確診，經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，患者及家屬知情同意，采用干細胞治療。排除腦積水、癲癇、大面積腦梗死及植物狀態(tài)病例。男12例，女5例，年齡中位數(shù)57歲，病程1～9年。其中腦出血后遺癥10例，腦梗死后遺癥7例。17例隨機分為A、B組，A組：9例，采用自體分選造血干細胞，男7例，女2例，均<60歲，中位數(shù)48歲，病程1～7年，患者均無高血壓、糖尿病、冠心病等基礎(chǔ)病，可耐受細胞動員劑及外周血干細胞采集，采用Barthel指數(shù)(BI)評分[1]為0～95分，平均50分。B組：8例，采用臍帶間充質(zhì)干細胞治療，男5例，女3例，年齡均>60歲，中位數(shù)67歲，病程1～9年，患者至少患有高血壓、糖尿病、冠心病等一種基礎(chǔ)疾病，無法耐受細胞動員劑及外周血干細胞采集，BI評分0～70分，平均55分。
　　2. 干細胞的制備：自體分選造血干細胞制備[2]：重組人粒細胞刺激因子(G-CSF)150～300 μg(華北制藥生產(chǎn)，批號200903Y21)/d1～3(指第1～3天)皮下注射，用COBE血細胞分離機采集外周血100～120 ml;CD34+干細胞經(jīng)Clini MACS儀器免疫磁柱分選，獲得(1.0～5.6)×107的CD34+細胞，流式細胞儀檢測陽性率為85%。將部分CD34+細胞分離液加入細胞保養(yǎng)液(CP-I)中，并放入-80℃冰箱凍存，以備后續(xù)治療用。臍帶間充質(zhì)干細胞制備[3]：采集新生兒臍帶(由三級甲等醫(yī)院婦產(chǎn)科提供)，將臍帶剪碎至約1 mm×1 mm×1 mm，經(jīng)0.1%膠原酶和0.125%的胰酶37 ℃分別消化30 min，先后用100目及200目濾網(wǎng)過濾，去除未消化的組織。過濾后的細胞按1×106/cm2接種于塑料培養(yǎng)瓶，用含DMEM-LG/F12(Sigma，USA),5%FCS(Gibco BRL，USA)的培養(yǎng)基，置37 ℃，體積分數(shù)為0.05的CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，4～5 d后換液，棄非貼壁細胞，以后每3～4 d半量換液。待細胞80%融合，0.25%胰酶(Sigma，USA)消化，按1×104/cm2傳代。貼壁細胞常規(guī)消化后，以FITC標記的CD105(SH2)、CD44抗體及其相應(yīng)同型對照標記細胞，流式細胞儀(FACA Calibur型，USA)檢測。獲得(1.0～5.6)×107的UC-MSC，流式細胞儀檢測陽性率為95%。
　　3. 治療方法：2組17例患者均在局麻下行腰椎穿刺蛛網(wǎng)膜下腔注入干細胞，4 ml/次(細胞數(shù)量1×107),1周注射1次，注射4次為1個療程;其中臍帶間充質(zhì)干細胞治療時，需靜脈給予地塞米松2～5 mg。治療后患者加強功能康復(fù)訓(xùn)練。
　　二、結(jié)果
　　1. 治療結(jié)果：治療后2個月隨訪17例患者均有不同程度療效，主要表現(xiàn)在吃飯、移動、活動、穿衣、上樓梯等方面。A組治療后患者BI評分提高0～20分，平均11分;B組BI評分提高5～15分，平均8分。年齡小、病程短的患者較年齡大、病程長的患者提高的幅度大;治療前評分低的患者治療后臨床癥狀改善明顯。A組2例治療前整體生活能力尚可，治療后2個月BI評分提高不明顯，性別與結(jié)果無相關(guān)性(圖1)。隨訪17例患者4～22個月，無頭痛、發(fā)熱等不良反應(yīng)，體力、精神、飲食較前有所好轉(zhuǎn)，能配合適合個體的康復(fù)訓(xùn)練，原患有的慢性疾病病情平穩(wěn)，B組患有高血壓、糖尿病、冠心病等基礎(chǔ)病的患者治療后發(fā)現(xiàn)基礎(chǔ)病較治療前在血壓、心功能等方面有一定改善，基礎(chǔ)用藥劑量無增加，并有逐漸遞減的趨勢。
　　2. 安全評估：A組在2次干細胞治療后，2例出現(xiàn)低顱壓癥狀，補充0.9%氯化鈉500 ml 后癥狀均消失;B組患者治療24 h后出現(xiàn)低顱壓癥狀1例，給予補充0.9%氯化鈉500 ml后癥狀消失，2例干細胞治療后2～3 h出現(xiàn)發(fā)熱，體溫37.5～38.0 ℃，4 h內(nèi)可自行消退，未用過退熱藥。臍帶間充質(zhì)干細胞來源于廢棄的臍帶組織，其抗原性低，不同于臍血干細胞需配型。治療后2個月17例患者復(fù)查血常規(guī)、肝功能、腎功能均正常，均無其他不良反應(yīng)。
　　三、討論
　　成體中樞神經(jīng)再生能力有限，損傷后不能自發(fā)修復(fù)。自1992年Revnokls等從成年鼠分離培養(yǎng)出干細胞后，大量研究發(fā)現(xiàn)，成年動物和人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的多個部位均存在干細胞，具有自我增殖和多向分化潛能，能分化為神經(jīng)元、少突膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞[4]。Kin等分別在鼠缺血性腦損傷的對側(cè)腦實質(zhì)內(nèi)或腦室內(nèi)移植干細胞。發(fā)現(xiàn)移植細胞的遷移范圍，后者較前者更大。故認為在早期的缺血性腦損傷中，腦脊液內(nèi)應(yīng)用移植細胞能更有效地播種在損傷部位。腦出血后，由于腦內(nèi)血腫的占位壓迫和手術(shù)操作的損傷，均可使部分腦組織受損，表現(xiàn)為局部血液循環(huán)障礙、神經(jīng)細胞壞死、神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)局部缺損、血腦屏障破壞，并由于水腫、缺血、毒素吸收等情況病灶周圍健存神經(jīng)細胞進一步遭到損傷。移植的干細胞識別病灶部位并選擇性地向病灶移動，相對密集地聚集在病灶中心及周邊，通過細胞替代或分泌營養(yǎng)物質(zhì)等方式促進損傷神經(jīng)功能的恢復(fù)[5]。目前國外有報道采用骨髓間充質(zhì)干細胞治療CVD后遺癥[6-7]，未見應(yīng)用自體分選CD34+干細胞及臍帶間充質(zhì)干細胞治療該病的報道。我細胞治療中心采用自體分選CD34+干細胞及臍帶間充質(zhì)干細胞經(jīng)腰椎穿刺蛛網(wǎng)膜下腔注入的方式，同時加強患者功能康復(fù)鍛煉，取得了較好的療效，干細胞治療2個月后，對17例患者進行BI評分，均有提高，A組平均提高11分，B組平均提高8分，主要表現(xiàn)在大便、小便、吃飯、移動、活動、穿衣、上樓梯等方面的恢復(fù)。患者病情近期的改善可能與一些細胞因子營養(yǎng)作用有關(guān)，而對于神經(jīng)功能恢復(fù)則需要在干細胞復(fù)制、多向分化潛能作用發(fā)揮后方可促進組織再生修復(fù)。造血干細胞與血管母細胞同源，具有很好的可塑性，能夠促使其發(fā)揮遷移、歸巢、遠合的特性，使造血干細胞可以重建病變部位的微循環(huán)及對血管內(nèi)皮細胞的修復(fù)，這樣的重建及修復(fù)需要一定濃度、純度的造血干細胞作為基礎(chǔ)，因此應(yīng)用分選的CD34+干細胞來實現(xiàn)這樣的目標。臍帶間充質(zhì)干細胞具有良好的跨系分化性、趨化性、低免疫源性及免疫調(diào)節(jié)性，其來源豐富、產(chǎn)率高，對年齡大、病情重、多器官功能減退的患者是很好的選擇。
　　干細胞為CVD后遺癥的治療提供了新的方法，但需要根據(jù)患者的具體情況選擇不同的干細胞進行治療，臨床上從患者改善的指標看令人鼓舞，且患者未出現(xiàn)明顯不良反應(yīng)。因此，干細胞治療CVD后遺癥是安全可行的，且明顯提高了患者生活質(zhì)量。影像學(xué)隨訪資料仍在進一步觀察中。
　　(本文圖片見光盤)

　　【參考文獻】
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