胸水DNA異倍體及CEA測定對惡性胸腔積液的診斷價值

　　作者：胡蔚,田秀虹,趙惠杰,康歡　　作者單位：吉林市第二中心醫(yī)院 呼吸科，吉林 吉林 132001

　　【摘要】 目的 探討胸水DNA異倍體及癌胚抗原(CEA)在惡性胸腔積液診斷中的價值。方法 對32例惡性胸腔積液患者和36例良性胸腔積液患者應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析胸水DNA異倍體及放射免疫方法測定CEA,比較兩組的測定結(jié)果。結(jié)果 惡性胸腔積液患者中有21例DNA異倍體陽性，陽性率65.6%;良性胸腔積液組均為陰性。胸水CEA測定惡性組18例陽性，陽性率56.3%;良性組5例陽性，陽性率13.8%。兩項指標(biāo)良惡性組間比較差異都有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。惡性胸腔積液組DNA異倍體與CEA同時陽性或其中一項陽性者29例，靈敏度為90.6%，特異度為。結(jié)論 胸水DNA異倍體與胸水CEA聯(lián)合檢測對惡性胸腔積液診斷價值更大。
　　【關(guān)鍵詞】 DNA異倍體 癌胚抗原 胸腔積液

　　胸腔積液可由多種病因引起，常見原因為結(jié)核性胸膜炎和惡性腫瘤胸膜轉(zhuǎn)移。目前診斷惡性胸腔積液的金標(biāo)準(zhǔn)是胸水中查到腫瘤細(xì)胞，但敏感性較低，即使胸腔內(nèi)已有明顯腫瘤轉(zhuǎn)移的患者，胸水病理檢查仍可為陰性。臨床上20%左右的胸腔積液通過常規(guī)檢查不能明確診斷。在原發(fā)病灶不清楚的情況下，胸腔積液良惡性的鑒別對病因診斷、下一步治療及預(yù)后判斷具有重要的價值。本研究對32例惡性胸腔積液患者和36例良性胸腔積液患者分別作胸水DNA異倍體測定、癌胚抗原(CEA)測定及病理細(xì)胞學(xué)檢查，以探討其在臨床診斷中的應(yīng)用價值。
　　1 資料和方法
　　1.1 病例選擇

　　選擇2002年3月至2005年10月我院呼吸科因胸腔積液住院患者共68例，其中惡性胸腔積液32例，男19例，女13例，年齡45歲～88歲，平均年齡67.2歲;其中肺癌胸膜轉(zhuǎn)移26例(肺鱗癌3例、腺癌19例、小細(xì)胞癌2例、病理類型不明確2例)，乳腺癌胸膜轉(zhuǎn)移4例，膀胱癌胸膜轉(zhuǎn)移1例，胃癌術(shù)后1例。以上病例均經(jīng)胸膜活檢、纖維支氣管鏡病灶活檢、胸水細(xì)胞學(xué)檢查及手術(shù)標(biāo)本組織病理學(xué)檢查確診，其中胸水中直接查到癌細(xì)胞者14例，均為腺癌。良性胸腔積液組36例，男21例，女15例，年齡28～78歲，平均53.6歲;其中結(jié)核性胸膜炎31例，膿胸2例，心力衰竭3例，均經(jīng)胸膜活檢、胸腔積液細(xì)胞學(xué)檢查及試驗性抗結(jié)核治療有效，胸水控制后2個月內(nèi)未復(fù)發(fā)及臨床相關(guān)資料綜合分析確定診斷。
　　1.2 檢測方法
　　DNA異倍體采用美國產(chǎn)貝克曼-庫爾特(Beckman coulter)Epics XL型流式細(xì)胞儀檢測。將抽取的胸水標(biāo)本靜止沉淀，用塑料吸管沿瓶底取沉淀物3管并離心(1000r•min-1，5min)，棄上清液;加4ml PBS緩沖液震蕩混勻洗滌，離心(1000r•min-1，5min)，棄上清液;將3管沉淀物用干凈塑料吸管收集到一起，加70%冷酒精固定24h。次日，將已固定好的胸水標(biāo)本取出離心(1000r•min-1，5min)，棄上清液;加4ml PBS緩沖液震蕩混勻洗滌，離心(1000r•min-1，5min)，棄上清液，留取沉淀物，加1ml PI染液染色0.5h，上機檢測至少1萬個細(xì)胞。判斷標(biāo)準(zhǔn)[1]：(1)出現(xiàn)DNA的非整倍體峰為惡性腫瘤細(xì)胞;(2)無明顯的非整倍體峰，但有1個突出的四倍體峰和大于15%的S期細(xì)胞，并伴有G0/G1期CV值大于9%為惡性腫瘤細(xì)胞;(3)無明顯的非整倍體峰，但G0/G1期CV值增大，并伴有10%～15%的S期細(xì)胞和1個突出的四倍體峰，診斷為可疑癌。
　　胸水CEA檢測方法采用放射免疫法，試劑盒由北京科美東雅生物技術(shù)有限公司提供，正常值<15ng•ml-1，陽性值>20ng•ml-1。
　　1.3 統(tǒng)計學(xué)處理
　　兩組陽性率的比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2 結(jié) 果
　　32例惡性胸腔積液組有21例DNA含量呈非整倍體或多倍體分布，陽性率65.6%;良性胸腔積液組均為陰性,兩組陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。胸水CEA測定惡性組18例陽性，陽性率56.3%;良性組中5例陽性，31例陰性，陽性率13.8%,兩組陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。DNA異倍體檢測靈敏度為65.6%，特異度為，準(zhǔn)確度83.8%;CEA測定靈敏度為56.3%,特異度為86.1%,準(zhǔn)確度為72.1%。惡性胸水組中，DNA異倍體與CEA同時陽性或其中一項陽性者29 例，靈敏度為90.6%，特異度為，準(zhǔn)確度為88.2%。
　　3 討 論
　　確診惡性胸腔積液的金標(biāo)準(zhǔn)是胸水中找到癌細(xì)胞，但其陽性率太低，滿足不了臨床需要。因此臨床上迫切需要尋找理想的腫瘤標(biāo)志物。CEA是存在于癌和胚胎組織中的一種高分子糖蛋白，它首先作為結(jié)腸癌的診斷標(biāo)志物應(yīng)用于臨床。目前作為腺癌的標(biāo)志物已廣泛應(yīng)用于臨床診斷，且在小細(xì)胞肺癌和肺鱗癌患者中，其陽性例數(shù)也為數(shù)不少。CEA是目前肺癌及癌性胸腔積液診斷特異性較好、應(yīng)用廣的標(biāo)志物。CEA檢測惡性胸腔積液的靈敏度為40%～70%，特異度達(dá)5%以上[2]。本研究中，CEA靈敏度為56.3%，與文獻(xiàn)報道相符。
　　細(xì)胞核DNA含量是細(xì)胞增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)，其含量與倍體特征直接反映了細(xì)胞增殖的活躍程度，人體正常的體細(xì)胞均有較恒定的DNA二倍體含量，細(xì)胞癌變過程中伴隨細(xì)胞DNA含量的改變，DNA非整倍體細(xì)胞是惡性腫瘤的特異性標(biāo)志。利用流式細(xì)胞儀(FCM)進(jìn)行胸腔積液脫落細(xì)胞DNA定量分析，異倍體的出現(xiàn)高度提示惡性胸腔積液[3]。也有觀點認(rèn)為在胸水中只要找到異常二倍體細(xì)胞，幾乎皆為惡性腫瘤，從而使細(xì)胞形態(tài)學(xué)診斷方法變?yōu)槎吭\斷，為早期診斷惡性腫瘤提供了依據(jù)[2]。目前絕大部分文獻(xiàn)報道FCM在鑒別良惡性胸腔積液時的特異度較高，而靈敏度偏低，有文獻(xiàn)報道，采用FCM進(jìn)行細(xì)胞核DNA定量分析，以異倍體診斷惡性胸腔積液的靈敏度為52%～94%[4]。本研究觀察32例惡性胸腔積液患者，DNA異倍體檢測靈敏度為65.6%，特異度為，與文獻(xiàn)[5]報道一致。若胸水DNA異倍體與CEA聯(lián)合檢測，則對惡性胸腔積液診斷的靈敏度達(dá)90.6%，特異度為，準(zhǔn)確度88.2%。因此我們認(rèn)為，DNA異倍體分析是鑒別良惡性胸腔積液的一項很有價值的指標(biāo)，當(dāng)臨床可疑而常規(guī)方法不能定性時，通過測定胸水細(xì)胞的DNA異倍體及CEA來綜合評估，可提高診斷效率。
　　【參考文獻(xiàn)】
　　[1]樊英，李龍蕓.流式細(xì)胞儀DNA倍體分析用于良惡性胸腔積液的鑒別診斷.癌癥進(jìn)展雜志，2005,3(3):249 251.

　　[2]羅詞文，李長生，胡浩.胸腔積液診療學(xué).北京:科學(xué)出版社，2001:128 135.

　　[3]Unger K M,Raber M,Bedrossian C W,et al.Analysis of pleural effuseion using automated flow cytometry[J].Cancer,1983,52(5):873 877.

　　[4]Janet S J,Eppich E,Greenebaum E,et al.Flow cytometry and feulgen cytopotometry in evaluateon of effuseions[J].Cancer,1987,59(7):1307 1313.

　　[5]李桂賓，孫玉紅，高穎.良惡性胸水的實驗室檢查新進(jìn)展.臨床肺科雜志，2005,10(3):361 363.