αadducin基因型與低腎素型原發(fā)性高血壓的關(guān)系

作者：趙利群, 高平進, 朱鼎良, 鄭明芳

作者單位：上海市瑞金醫(yī)院上海市高血壓研究所，上海 200025

【摘要】  目的 研究αadducin基因Gly460Trp多態(tài)性與低腎素型原發(fā)性高血壓的關(guān)系。方法 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測基因型，采用放射免疫分析法測定樣本的血漿腎素活性（PRA）。結(jié)果 αadducin基因 Gly460Trp突變沒有損傷腎臟鈉鹽調(diào)控，不影響腎素水平，低腎素型原發(fā)性高血壓與正常腎素型原發(fā)性高血壓的基因型分布差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論 αadducin基因Gly460Trp多態(tài)性與低腎素型原發(fā)性高血壓無相關(guān)性。

【關(guān)鍵詞】  αadducin； 多態(tài)性； 腎素； 原發(fā)性高血壓

    Relationship between Gly460Trp polymorphisms of αadducin gene and low renin hypertension   ZHAO Liqun1，2，GAO Pingjin1，ZHU Dingliang1，ZHENG Mingfang2. 1. Shanghai Ruijin Hospital, Shanghai Hypertension Institute, Shanghai 200080, China; 2. ICU of emergency department, Shanghai No1 People’s Hospital, Shanghai 200025, China

    Abstract：ob[x]jective  To investigate the relationship between Gly460Trp polymorphisms of αadducin gene and low renin hypertension.   Methods  Genotypes of αadducin was determined by polymerase chain reaction (PCR)polyacrylamide gel electrophoresis. Plasma renin activity（PRA） was detected by radio immunoassay.   Results  Gly460Trp polymorphisms of α adducin gene was not associated with PRA. No significant difference of αadducin genotypes was found between low renin hypertensive patients and normal renin hypertensive patients.   ConclusionsThere is no relationship between Gly460Trp polymorphisms of αadducin gene and low renin hypertension.

    Key words：  αadducin;  Polymorphism;  Renin;  Essential hypertension

    原發(fā)性高血壓是一種由遺傳因素和環(huán)境因素共同作用引起的疾病，一般認為人群中血壓變異的30%～50%是由遺傳因素決定的，目前與原發(fā)性高血壓相關(guān)的基因大約150多種，1997年Cusi等[1]在意大利和法國人群中證實了αadducin基因Gly460Trp突變，并發(fā)現(xiàn)T等位基因與高血壓相關(guān)（P＜0.05）。自此以后，許多研究都在關(guān)注αadducin基因與高血壓的相關(guān)性，但各家報道不一。1998年Kazuhiko[2]發(fā)現(xiàn)在日本人中盡管Gly460Trp突變發(fā)生率很高，但是T等位基因與高血壓發(fā)病機制無關(guān)，這個結(jié)果在中國、美國、荷蘭及其他種族中同樣得到了證實[35]。當然還有相反報道，如：Nicola等[6]報道在意大利高血壓患者中T等位基因頻率較正常人高(P＜0.05)， T等位基因攜帶者腎素水平低，應(yīng)用利尿劑治療血壓下降明顯，南非、北歐（斯堪的納維亞人）和日本研究者同樣認為αadducin基因Gly460Trp突變與高血壓密切相關(guān)[79]。

    原發(fā)性高血壓根據(jù)腎素水平可分為高腎素型、正常腎素型和低腎素型3種類型[10]，低腎素型高血壓就是鹽敏感性高血壓。αadducin基因是與鈉鹽代謝相關(guān)的基因，T等位基因可能通過激活NaKATP酶促使腎小管重吸收而影響血壓[1]，本研究通過腎素中間表型將原發(fā)性高血壓進一步細分，從而探討αadducin基因與低腎素型原發(fā)性高血壓關(guān)系。

　　1  對象和方法

    1.1  研究對象

    病例組278例來自2000年2月至2002年7月上海市瑞金醫(yī)院高血壓科住院患者，入選高血壓患者男149例，女129例，平均年齡(56.6±12.6)歲。正常對照組231例來自上海某工廠體檢者，男128例，女103例，平均年齡（51.0±5.2）歲。

    高血壓患者入選標準:收縮壓≥140 mm Hg (1 mm Hg＝0.133 kPa)或舒張壓≥90 mm Hg，患者未服用抗高血壓藥物或停用抗高血壓藥物兩周，除外心衰、腦出血和腎臟疾病，排除繼發(fā)性高血壓。

    正常腎素標準：基礎(chǔ)血漿腎素活性0.1～5.5 ng·ml－1·h－1，激發(fā)（立位2 h+速尿20 mg肌注）血漿腎素活性0.73～17.4 ng·ml－1·h－1。

　　2  研究方法

    2.1  DNA抽取

    抽取外周靜脈血4 ml，EDTA抗凝，紅細胞清洗液2 ml洗滌，離心3次，取沉淀，再加白細胞裂解液2 ml、蛋白酶K 18 μg，37℃水浴4 h，加酚、氯仿、乙醇提取白細胞基因組。

    2.2  αadducin基因型檢測

    (1)PCR擴增：以基因組DNA作為模板進行PCR擴增，引物根據(jù)adducin序列利用Primer3引物設(shè)計軟件設(shè)計，由上海生工合成。

    野生型引物序列： 5′GGG GCG ACG AAG CTT CCG AGC TAG3′突變型引物序列：5′GCT GAA CTC TGG CCC AGG CGA CGA AGC TTC CGA GGA TT3′互補引物序列：  5′CCT CCG AAG CCC CAG CTA CCC A3′

    30 μl PCR反應(yīng)體系：模板100 ng，野生型引物和突變型引物序列各15 pmol/L，互補引物20 pmol/L dNTPs和Tag DNA聚合酶2U。擴增條件：94℃預(yù)變性，隨后94℃變性45 s，退火1 min，72℃延伸1 min，共35個循環(huán)，后置于72℃延伸10 min。

    (2) 電泳：采用聚丙烯酰胺凝膠電泳，凝膠濃度8%，將3 μl上樣緩沖液（0.2%溴酚藍，30%甘油）與10 μl PCR產(chǎn)物混勻取8 μl上樣。采用垂直電泳槽電泳，在恒壓（130V）下電泳5 h，然后將凝膠染色觀察，記錄結(jié)果。MSPCR法αadducin基因分型可見G、T等位基因的擴增片段長度分別為220 bp和234 bp，擴增產(chǎn)物中只含有220 bp片段，基因型為GG純合型，只含有234 bp片段，基因型為TT純合型，同時含有220 bp和234 bp片段者，基因型為GT型。

    2.3  血漿腎素測定

    清晨臥位空腹采肘靜脈血2 ml，肝素抗凝，離心分離，去上清液，置－20℃低溫冰箱保存待測。采用放射免疫分析法測定樣本中腎素各值測定中均選用北京北方所放免試劑盒。

    2.4  統(tǒng)計學(xué)處理

    應(yīng)用SPSS10.0軟件包進行統(tǒng)計分析，各統(tǒng)計指標均以均數(shù)±標準差（±s）表示。計量資料的組間比較采用團體t檢驗和ANOVA，計數(shù)資料的組間比較采用χ2檢驗。血壓與基因型的關(guān)系用多元線性回歸分析，P＜0.05認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

　　3  結(jié)果

    對高血壓組和正常組的基因型分布進行了平衡檢驗，高血壓組χ2=0.257, χ2＜χ20.05=3.841（P＞0.05）; 正常組χ2=0.192, χ2＜χ20.05=3.841（P＞0.05），即各基因型與根據(jù)HardyWeinberg遺傳平衡定律預(yù)測的頻率之間無統(tǒng)計學(xué)差異。由此可見，兩組基因型都符合HardyWeinberg遺傳平衡。本研究顯示中國人TT基因型頻率高于高加索人（11.0% vs.4.1%）[1]，但低于日本人（11.0% vs.28.5%）[11]。原發(fā)性高血壓與正常血壓組基因型分布和等位基因頻率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（表1）。高血壓組αudducin不同基因型一般資料見表2。

    可以看出3種基因型的性別、年齡、IBM、24 h尿鈉、尿鉀排泄量、PRA差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但TT型年齡較GT、GG型小（54.57±1.7 vs.57.42±1.09、56.60±1.29），IBM也小（24.62±0.40 vs. 25.38±0.32、25.76±0.38 ）。GG型、GT型、TT型24 h平均收縮壓差異有統(tǒng)計學(xué)意義（151.62±1.71、154.32±1.42、146.38±2.37，P=0.013），但舒張壓沒有差異。通過多元線性回歸分析，排除性別、年齡、IBM等因素的影響，3種基因型與24 h收縮壓、舒張壓不存在相關(guān)性［以性別、年齡、IBM及基因型為自變量，收縮壓、舒張壓為因變量P=0.077(SBP)  P=0.126(DBP）］（表2）。低腎素組和正常腎素組高血壓患者的性別、年齡、IBM和血壓差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但低腎素組的年齡較大，收縮壓偏高（表3）。將高血壓組細分為低腎素和正常腎素兩組，兩組間3種基因型及等位基因分布差異無統(tǒng)計學(xué)意義。低腎素組TT型所占比例為18.6%與正常腎素組相比（20.8%）沒有差異（表4）。 表1  高血壓與正常組之間αadducin基因型和基因頻率比較 表2  高血壓組αadducin不同基因型一般資料的比較表3  不同腎素高血壓組一般資料的比較表4  低腎素型高血壓組和正常腎素型高血壓組αadducin基因型和等位基因頻率

    4  討論

    本研究入選的患者為未服用降壓藥的輕度高血壓患者，應(yīng)用動態(tài)血壓作為血壓指標，與偶測血壓相比，可以更好反映患者的真實血壓。從表2可以看出3種不同基因型的收縮壓不同，TT型收縮壓低，但通過多元線性回歸分析，排除年齡、IBM等因素的影響，發(fā)現(xiàn)收縮壓與基因型之間不存在相關(guān)性。收縮壓升高與動脈彈性關(guān)系密切，動脈硬化程度與年齡相關(guān)，年齡越大，動脈硬化程度越高，老年性高血壓的特點就是以收縮壓升高為主。在這3種基因型中TT型年齡小，GT型年齡大，收縮壓也高，所以表1看到的收縮壓差異是年齡引起的，與基因突變無關(guān)。這個推論在表1和表3中可以進一步得到證實：高血壓組和正常血壓組基因型分布沒有差異，低腎素組的收縮壓高于正常腎素組，這個差異與年齡有關(guān)。

    文獻報道,有高血壓家族史的人群鹽敏感發(fā)生率高，即使目前血壓正常，將來發(fā)生高血壓的幾率明顯高于其他人群[12]。以前一些研究認為鹽敏感是由于腎臟自身問題或循環(huán)和神經(jīng)因素影響腎臟功能而造成的。譬如一些鹽敏感患者存在胰島素抵抗[13]，在糖皮質(zhì)激素可治療性高醛固酮癥（GRA）中，患者的鹽皮質(zhì)激素生成增加導(dǎo)致鈉重吸收增多[14]。但Liddle’s綜合征和表現(xiàn)鹽皮質(zhì)激素過多綜合征是因為單基因突變改變了鈉調(diào)節(jié)而導(dǎo)致鹽敏感性高血壓[15]。αadducin是細胞膜骨架蛋白，與跨膜離子轉(zhuǎn)運、細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)，那么Gly460Trp突變是否可以改變腎小管重吸收功能，各家報道不一。Kamitani認為Gly460Trp突變與腎小管鈉鹽調(diào)控?zé)o關(guān)[16]，其他研究顯示T等位基因攜帶者應(yīng)用利尿劑后平均動脈壓下降明顯，基礎(chǔ)PRA水平低，F(xiàn)ENa降低[1]。近來，F(xiàn)rederick 通過檢測紅細胞鈉鉀離子相互轉(zhuǎn)運（SLC）進一步證實了TT基因型改變了細胞內(nèi)外鈉交換，損害了鈉調(diào)控。本研究入選的高血壓患者沒有腎臟疾病，同時對鈉鹽攝入進行了嚴格控制，在排除飲食和腎臟自身病變對鈉鹽排泄的影響基礎(chǔ)上，3種基因型24 h尿鈉、尿鉀排泄量差異無統(tǒng)計學(xué)意義，也就是說Gly460Trp突變對腎小管鈉鹽調(diào)節(jié)沒有影響。

    雖然3種基因型的PRA差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但TT型PRA小，GT型大，這3組當中TT基因型年齡小，而GT型年齡大，隨著年齡增長，血漿腎素水平下降，尤其年齡大于60歲[10]。從表2結(jié)果來看純合TT型似乎對腎素水平有影響。現(xiàn)將原發(fā)性高血壓分為低腎素組和正常腎素組，并未發(fā)現(xiàn)兩組的基因分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義，也就是說αadducin基因的G/T多態(tài)性與低腎素型高血壓無關(guān)。

    綜上所述，αadducin Gly460Trp突變沒有損傷腎臟鈉鹽調(diào)控，不影響腎素水平，與低腎素型原發(fā)性高血壓發(fā)病無相關(guān)性。

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