類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清和關(guān)節(jié)液中趨化因子的測(cè)定及其意義

   　作者：張逸彪　　作者單位：321000 浙江金華廣福醫(yī)院

　　【關(guān)鍵詞】 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎,關(guān)節(jié)液中趨化因子的測(cè)定

　　據(jù)新統(tǒng)計(jì)，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎( rheumatoid arthritis, RA)在全球的發(fā)病率為22～60/10萬人口，在關(guān)節(jié)炎中它是致殘率較高的疾病。雖然類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制目前仍不十分明確，但是許多研究表明細(xì)胞因子作用于多種細(xì)胞并且相互調(diào)節(jié)形成一個(gè)網(wǎng)絡(luò)，在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的滑膜病變中起著核心作用[1]。調(diào)節(jié)活化正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(regulated on activation normal T cell expressed and secreted，RANTES)及SDF-1 (stromal cell-derived factor-1)均為炎癥性趨化因子，具有調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞分化的功能。作者對(duì)RA患者血清和病變膝關(guān)節(jié)滑液中RANTES和SDF-1水平進(jìn)行檢測(cè)，并與外傷截肢者對(duì)照，旨在探討其在RA發(fā)病中的作用。

　　1 資料與方法

　　1.1 一般資料

　　實(shí)驗(yàn)組血清及膝關(guān)節(jié)滑液取材于2002至2005年金華各醫(yī)院風(fēng)濕科初診RA患者23例，均符合1987年美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)修訂的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照組血清及膝關(guān)節(jié)滑液均為本院因外傷截肢患者共16例。

　　1.2 標(biāo)本收集

　　抽取空腹外周靜脈血5ml，以2500r/min離心15min，取血清，置于-20℃?zhèn)錂z。細(xì)針抽取關(guān)節(jié)滑液2ml，置于-80℃?zhèn)錂z。

　　1.3 檢測(cè)方法

　　RANTES及SDF-1的檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，操作按照R&D試劑盒說明書進(jìn)行。其主要步驟為：分別向包被鼠抗人RANTES單抗和SDF-1單抗的微孔內(nèi)加入50μl的RANTES、SDF-1標(biāo)準(zhǔn)品或檢測(cè)血清、按1：3稀釋的關(guān)節(jié)滑液，將96孔板蓋上薄膜置于室溫中孵育2 h，孵育后洗滌3次。分別加入50μl酶聯(lián)復(fù)合物，顯色，全自動(dòng)酶標(biāo)儀分別讀取RANTES及SDF-1濃度，標(biāo)本均行復(fù)孔檢測(cè)，均值為終濃度。

　　1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

　　數(shù)據(jù)以(x±s)表示，兩組間比較采用SPSS 11.0軟件，作t檢驗(yàn)。

　　2 結(jié)果

　　兩組血清及滑液RANTES、SDF-1水平的比較見表1，RA組患者血清及關(guān)節(jié)滑液RNATES的水平顯著高于對(duì)照組，且RA組內(nèi)關(guān)節(jié)滑液中的含量較血清中明顯升高，差異有顯著性(P<0.05)。RA患者血清及關(guān)節(jié)滑液SDF-1的水平高于對(duì)照組，差異有顯著性(P<0.01)，但是RA組內(nèi)關(guān)節(jié)滑液中的SDF-1含量與血清相比，差異無顯著性。表1 兩組血清及滑液RANTES、SDF-1的水平(略)注：同組內(nèi)與血清水平比較P<0.01;與對(duì)照組比較#P<0.05

　　3 討論

　　RA是以關(guān)節(jié)滑膜有慢性炎癥和血管翳形成，軟骨和軟骨下骨破壞，終造成關(guān)節(jié)軟骨破壞并導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和強(qiáng)直，為主要病理改變的自身免疫性疾病。而趨化因子是一組具有趨化作用的細(xì)胞因子,能吸引免疫細(xì)胞到免疫應(yīng)答局部,參與免疫調(diào)節(jié)和免疫病理反應(yīng)。有研究證實(shí)，RANTES 通過與細(xì)胞表面相應(yīng)的CC 亞族趨化因子受體(CCR1、CCR3 和CCR5) 結(jié)合，特異吸引CD4+ / CDRO45+ T 細(xì)胞進(jìn)入炎性部位，在RA的發(fā)生發(fā)展中起著極為重要的作用。RANTES介導(dǎo)炎癥過程與其受體CCR5內(nèi)皮細(xì)胞上的表達(dá)密切相關(guān)[2]。基質(zhì)細(xì)胞衍生因子一1(SDF一1)是趨化因子CXC亞家族的重要成員之一，主要表達(dá)在慢性炎癥組織如銀屑病皮膚和風(fēng)濕病滑膜，通過與其受體CXCR4的結(jié)合趨化內(nèi)皮細(xì)胞而參與血管形成過程。在RA 患者的滑膜中，SDF-1可結(jié)合在內(nèi)皮細(xì)胞表面的硫酸乙酰肝素分子上，促進(jìn)血管形成和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，從而在RA中發(fā)揮多種功能[3]。如調(diào)節(jié)白細(xì)胞通過內(nèi)皮細(xì)胞屏障進(jìn)入炎癥部位，造成組織損傷和疾病狀態(tài)，與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的慢性多關(guān)節(jié)滑膜炎病變有關(guān)[4]。

　　作者通過采用ELISA 方法檢測(cè)RA患者血清及關(guān)節(jié)液的RANTES、SDF-1水平，并與外傷截肢者對(duì)照，結(jié)果發(fā)現(xiàn)RA患者血清和滑液中RANTES、SDF-1 水平均顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，且RA 患者關(guān)節(jié)液RANTES 水平升高更為明顯(P<0.01)。而RA患者血清SDF-1水平與滑液相比差異無顯著性(P>0.05)。本實(shí)驗(yàn)中RA患者關(guān)節(jié)液RANTES 水平升高與血清相比更為明顯，提示RA患者血清增高的RANTES主要來自于病變關(guān)節(jié)部位，這與以前的研究有相似之處。正常情況下,細(xì)胞因子的表達(dá)和分泌受機(jī)體嚴(yán)格的調(diào)控,在病理狀態(tài)下,細(xì)胞因子會(huì)出現(xiàn)異常性表達(dá),表現(xiàn)為細(xì)胞因子及其受體的缺陷,細(xì)胞因子表達(dá)過高,以及可溶性細(xì)胞因子受體的水平增加等。在本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的RANTES，SDF-1含量明顯增高，而這些細(xì)胞因子均可促進(jìn)大量炎癥細(xì)胞如粒細(xì)胞,巨噬細(xì)胞的局部浸潤(rùn)和組織壞死，加重病情，這不僅為揭示某些趨化因子與RA發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，而且，也為臨床治療RA提供了新的思路，即應(yīng)用這些細(xì)胞因子的抑制劑有可能治療這類炎癥性細(xì)胞因子水平升高的疾病。但還需進(jìn)一步深入研究。